潔淨實驗室

潔淨 實驗室要求：
1實驗室環境應清潔、衛生、安靜，實驗室內(nei) 嚴(yan) 禁吸煙和飲食。
2實驗人員必須穿戴工作衣帽，工作服經常洗滌、消毒、保持清潔。
3操作前後或離開實驗室必須用肥皂或消毒液洗手。
4發生菌液汙染台麵或地麵，應立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向內(nei) 傾(qing) 覆其上，1小時後再擦拭，如為(wei) 破傷(shang) 風梭菌，則應隔夜後再擦洗。
5工作衣、帽、口罩受到菌液汙染時，應立即脫下使汙染部位包裹在內(nei) 部，高壓滅菌後再清洗。
6如有傳(chuan) 染性培養(yang) 物汙染手部，應先用75％乙醇棉球擦拭，再浸入0.1%新潔爾滅消毒液內(nei) 泡手，然後再用肥皂及清水徹底洗幹淨。
7接種環（針），每次使用前後，必須通過火焰滅菌，冷卻後方可接種培養(yang) 物，接種帶有蠟質、油質的培養(yang) 物或菌苔殘留多時，不應立即在火焰上灼燒，應先在內(nei) 焰裏將油質培養(yang) 物烘幹後再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺汙染環境及感染操作者。
8帶菌的吸管應浸泡在5％甲酚消毒液內(nei) 24h後取出清洗，帶菌的試管或培養(yang) 物應在121℃高壓滅菌30分鍾後再取出清洗。
9在接種黴菌、放線菌時應在鋪有浸過消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳(chuan) 播。
10廢棄物的處理：

1. 必須消除生物危害後，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。
2. 汙染性銳器（如一次性針頭）應滅菌後處理，注意避免銳器紮傷。
3. 汙染性可重複使用的材料（如平皿）應滅菌後清洗，宜使用不易破碎的材料。
4. 工作服（含潔淨工作服）應定期清洗，懷疑汙染的工作服應滅菌後清洗，潔淨工作服應滅菌後使用。

 無菌操作要求：
無菌操作是指在無菌的環境條件下，使用無菌器材，防止微生物汙染的操作技術。即保持待檢樣品在操作時不被汙染，又要防止被檢的微生物及陽性對照菌在操作中汙染環境或感染操作人員。從(cong) 事無菌及微生物操作的工作人員必須經過無菌技術及基礎微生物學專(zhuan) 業(ye) 知識的學習(xi) 及培訓才具備上崗操作的資格，微生物專(zhuan) 業(ye) 檢驗人員也不應該頻繁地變換工作崗位。
1.無菌室應每次使用前後用0.1%苯紮溴銨溶液或2％甲醛液擦拭工作台麵及可能汙染的死角，濕拖地麵，打開無菌空氣過濾器及超淨工作台的開關(guan) 30分鍾，紫外線殺菌燈照射1小時。
2.操作人員用肥皂洗手後進入緩衝(chong) 間換拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝去牛皮紙及外包裝，從(cong) 傳(chuan) 遞窗移入操作間，再用0.1%苯紮溴銨溶液泡手後進入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區（火焰高度3－5cm）操作。
3供試品表麵消毒，如為(wei) 安瓿先用砂輪劃痕後用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待幹，也可以用消毒液浸泡消毒。
4操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人員及口中的雜菌汙染供試品。
5在無菌操作中切勿大幅度或快速動作、拖行，以免攪動空氣中塵埃微粒。
6注射器如需回抽時，應對著火焰吸入無菌空氣。
7所用的器材如培養(yang) 基、稀釋劑配製後經濕熱滅菌121℃30分鍾，吸管培養(yang) 皿等均應洗滌，幹燥，包紮後經幹熱滅菌160℃2小時才能使用。

消毒劑的質量控製 

（一）消毒劑安全使用原則

1.正確選擇消毒劑的種類，盡可能選擇低毒、低殘留的消毒劑。

2.正確選擇使用濃度，確保消毒效果。

3.正確選擇消毒方式，可以浸泡、擦拭或噴霧。

4嚴(yan) 格掌握消毒時間。

5.定期更換，避免產(chan) 生耐藥性。

6.不聯用和混合使用。

7消毒前，應進行清潔。

（二）消毒劑的種類 

1.高效消毒劑（HLD）：能殺滅一切微生物（包括芽孢），常見的有過氧乙酸、甲醛、環氧乙烷和含氯消毒劑

2.中效消毒劑（ILD）：能殺滅抵抗力較強的結核杆菌和其他細菌、真菌和大多數病毒，常見的有乙醇、苯紮溴銨、碘酊和甲酚皂溶液等

3.低效消毒劑（LLD）：能殺滅除結核杆菌以外的抵抗力較弱的細菌以及抵抗力較弱的真菌（如念珠菌）和病毒（如流感病毒、艾滋病毒等），常見的有氯已定、三氯散和高錳酸鉀等

消毒劑配製

1.根據消毒劑使用區域和對象的不同，將消毒劑分成3類，分別是：

第一類消毒劑，專(zhuan) 用於(yu) 普通實驗區，僅(jin) 用於(yu) 物品外表麵的消毒，常用的有聚維酮碘和石炭酸等；

第二類消毒劑，專(zhuan) 用於(yu) 潔淨室的更衣室，僅(jin) 用於(yu) 佩戴手套的雙手消毒，常用的有苯紮溴銨和75％乙醇；

第三類消毒劑，專(zhuan) 用於(yu) 無菌操作間，直接用於(yu) 消毒直接接觸藥品的容器表麵，也用於(yu) 實驗操作過程中的手部消毒和實驗台麵消毒，常用的有聚維酮碘溶液和75％乙醇。

2.配製

第一類消毒劑的配製方法：不需使用無菌器具，可直接在普通實驗區按消毒劑使用說明書(shu) 的配製方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液後使用。

第二類消毒劑的配製方法：不需使用無菌器具，應在更衣室內(nei) 按消毒劑使用說明書(shu) 的配製方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液後使用。

第三類消毒劑的配製方法：需要使用無菌器具並在無菌操作間內(nei) 配製。首先取一次性集菌過濾器一個(ge) ，將排液口放置在滅菌過的錐形瓶上，將消毒劑濃溶液通過薄膜過濾的方式除菌。然後，按比例取滅菌後的純化水，稀釋濃溶液，製成可供使用的消毒劑。將此消毒劑倒入放置有無菌脫脂棉球的消毒劑缸中，得到可直接使用的消毒劑棉球。（該類消毒劑製備後，應收集消毒劑中的微生物）

環境監控

（一）目的：

確定工作台麵、設備表麵的消毒效果和消毒頻次，確定潔淨室的綜合性能以及進行維護的時機，確定培養(yang) 箱的汙染情況，判斷是否有必要進行徹底消毒。

（二）環境監控的對象

1.樣品貯存的環境

2.培養(yang) 基製備的環境

3.樣品製備和檢驗的環境

4.培養(yang) 的環境

（三）環境監控的方法

1.表麵微生物數

• 擦拭法（棉拭子法）
• 淋洗法
• 影印盤法（RODAC法）

2.空氣微生物數

• 沉降菌法     浮遊菌法

浮遊菌數的測定：采用浮遊菌測定儀(yi) 。
沉降菌數測定：方法：無菌室及淨化工作台麵消毒擦拭後，打開層流淨化裝置及淨化工作台開關(guan) 30min，將營養(yang) 瓊脂平板3個(ge) 及玫瑰紅鈉瓊脂平板3個(ge) （直徑9cm），置淨化工作台左、中、右各1個(ge) ，開蓋暴露30min後將蓋蓋上，分別放在30－35℃培養(yang) 箱內(nei) 培養(yang) 48h及25－28℃培養(yang) 箱內(nei) 培養(yang) 72h，細菌和真菌平均菌落數小於(yu) 等於(yu) 1個(ge) 為(wei) 100級。實驗室一旦被汙染，潔淨度達不到要求，可以清洗或更換淨化工作台過濾器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：在支架上放一個(ge) 燒杯（內(nei) 裝少許甲醛，8ml／平方米），下麵放一個(ge) 裝有少許乙醇的乙醇燈，點燃後，關(guan) 閉門窗，乙醇用盡後燈自滅，甲醛蒸氣充滿無菌室，密閉24h。
缺點：甲醛蒸氣易鏽蝕儀(yi) 器，對人有刺激，可用氨水噴霧中和，減少對人眼的刺激。
 

環境監控的評價(jia) 指標

1.表麵微生物數

1.1需氧嗜溫菌小於(yu) 5cfu/cm2，合格

1.2需氧嗜溫菌在5～25cfu/cm2之間，需進一步調查

1.3需氧嗜溫菌大於(yu) 25cfu/cm2，不合格，應立即消毒處理

2.空氣微生物數

沉降菌大於(yu) 15cfu/板，應暫停工作，進行消毒